生命科学研究中常用的几种实验方法

生命科学研究时生物学的分支，下面介绍几个关于生命科学常用的几种实验方法：
一、BCA法测蛋白质浓度

实验原理：BCA(bicinchoninic acid，二辛可酸)法测定蛋白质即在碱性条件下蛋白质与Cu2+络合，并将其还原成Cu1+。Cu1+和BCA试剂反应使其由原来的苹果绿形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm有强烈的光吸收，且吸光值和蛋白质浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此可用于蛋白质浓度测定。

二、免疫组化

原理:免疫组织化学，即免疫组化，是应用免疫学基本原理一-抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、翻、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原《多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。常用于免疫组化实验的有组织石蜡切片、组织冰冻切片、细胞爬片或细胞涂片。

三、RNA提?。═rizol法）

Trizol试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层（无色）主要为RNA，有机层（黄色）主要为DNA和蛋白质。

四、RT-PCR

RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中，每一步都在最佳条件下进行。

实验步骤主要包括：1、RNA的提??；2、反转录合成cDNA；3、PCR扩增；4、产物的电泳和结果的测定。

五、实时荧光定量PCR（Q—PCR）（Real-time Quantitative PCR ）

利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。

阈值：是循环开始3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍，设定在扩增曲线指数增长期。

C(t)值：荧光信号（扩增产物）到达阈值时所经过的扩增循环次数。
 

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