在基因克隆、载体构建等实验中，限制性内切酶是核心工具，但传统酶存在三大瓶颈：

1. 耗时低效：需 30 分钟 - 2 小时酶切，且需提前孵育缓冲液；

2. 多步换液：酶切后需纯化或更换 Buffer 才能进行去磷酸化 / 连接，增加污染风险；

3. 兼容性差：不同品牌试剂缓冲体系不统一，常导致反应效率下降（如连接效率降低 40%）。

LightNing® 快速内切酶通过基因工程改造酶蛋白 + 优化缓冲体系，系统性解决上述问题，尤其适合高通量克?。ㄈ缭靥蹇夤菇?、基因突变分析）。

二、LightNing® 核心技术优势：三大革新提升实验效率

1. 超速酶切：5 分钟完成质粒酶切（传统酶需 30 分钟）

· 工程化改造：通过定向进化技术优化酶 - 底物结合位点，催化效率提升 5 倍，5 分钟内酶切效率≥95%（SDS-PAGE 验证）；

· 适用范围广：兼容质粒 DNA（1μg）、PCR 产物（500bp-10kb）、基因组 DNA（哺乳动物 / 植物源），推荐酶用量仅 0.5μL / 反应。

2. 单 Buffer 通吃：CutOne® 体系支持 “酶切 - 修饰 - 连接" 一管化

· 缓冲液：CutOne®/CutOne® Color Buffer（含可视化染料）含 Mg2+/ATP 等多酶协同因子，确保：
? 内切酶活性：37℃下 15 分钟完成难切位点（如 GC-rich 区域）酶切；
? 去磷酸化活性：CIAP / 虾碱性磷酸酶在 CutOne® 中活性达 100%（传统 Buffer 仅 70%）；
? 连接效率：T4 DNA 连接酶在 CutOne® 中 25℃ 10 分钟完成黏性末端连接，效率比传统体系提升 20%。

3. 高性价比：50 + 常用酶覆盖 95% 分子克隆需求

三、标准化实验流程：从酶切到连接只需 3 步

Step 1：体系配置（5 分钟）

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DNA模板（1μg） 5μL

CutOne® Buffer 2μL

LightNing®酶 0.5μL

ddH2O补至 20μL

· 无需预混 Buffer，直接按体积比添加（酶体积≤反应体系 5%）；

· CutOne® Color Buffer 含蓝色染料，可直接上样电泳观察酶切进度。

Step 2：酶切反应（5-15 分钟）

· 37℃孵育 5 分钟（普通位点）或 15 分钟（难切位点），无需热启动；

· 支持室温（25℃）酶切（如 NotI 等冷敏感酶），适合野外或无温控场景。

Step 3：一管化修饰 / 连接（10 分钟）

· 去磷酸化：直接添加 CIAP（1U），37℃ 5 分钟灭活内切酶同时去磷酸化；

· 连接反应：添加 T4 连接酶（1μL）及 ATP（终浓度 1mM），25℃ 10 分钟完成连接。

对比传统流程：总耗时从≥60 分钟缩短至≤30 分钟，减少 2 次离心换液步骤，污染风险降低 70%。

四、目标客户与场景适配

1. 科研实验室（高校 / 研究所）

· 痛点：硕士 / 博士需同时处理多个克隆项目，时间成本高；

· 解决方案：LightNing® 50μL 小规格包装（适合少量多次实验），搭配免费 Protocol（含 CRISPR 载体构建案例）。

2. 生物制药企业（工艺开发）

· 需求：GMP 级酶需批次稳定性高、兼容性强；

· 产品优势：提供 1mL/5mL 工业级包装，每批次通过 STR 基因分型及酶活一致性检测（变异系数＜5%）。

3. 分子诊断公司（试剂盒开发）

· 核心诉求：试剂需适配自动化平台（如移液工作站）；

· 技术优势：CutOne® Buffer 黏度低（2.3cP），适合机械臂精准加样，已通过 Beckman Coulter 平台兼容性测试。

五、选购与技术支持

1. 产品参数

· 保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（建议分装 5μL / 管）；

· 运输条件：冰袋冷藏运输（4℃可稳定 72 小时）；

· 质检报告：每批次提供酶切效率（≥95%）、内毒素（＜10EU/mL）、支原体检测报告。

2. 增值服务

· 免费酶切位点分析：提供载体序列，技术团队 24 小时内反馈最佳酶切方案；

· 定制化开发：支持稀有酶（如 I-SceI、AscI）工程化改造，周期 4-6 周。

六、数据验证：第三方实验室效果对比

LightNing®   快速内切酶通过 “超速酶切 + 单 Buffer 兼容" 技术，重新定义分子克隆效率标准，尤其适合需要高频酶切连接的实验（如载体构建、基因突变筛?。?。苏州阿尔法生物提供的试剂从常用酶到稀有酶的全产品线，搭配 CutOne® Buffer 一站式解决方案，助力科研与工业用户突破传统酶切瓶颈。