琼脂糖核酸电泳介绍

琼脂糖核酸电泳步骤

1.    用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净， 放在制胶平板上， 封闭模具边缘， 架好梳子；

2.    根据欲分离 DNA 片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶：准确 称量琼脂糖干粉， 加入到配胶用的三角烧瓶内， 定量加入电泳缓冲液（一般

20~30 ml）；

3.    放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻， 加入一滴荧光染料，轻轻旋转以充分

混匀凝胶溶液，倒入电泳槽中，待其凝固；

4.    室温下 30~45 分钟后凝胶全凝结， 小心拔出梳子， 将凝胶安放在电泳槽内；

5.    向电泳槽中倒入电泳缓冲液，其量以没过胶面 1mm 为宜，如样品孔内有气

泡，应设法除去；

6.    在 DNA 样品中加入 10×体积的载样缓冲液（loading buffer），混匀后，用枪

将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内；

7.    接通电源， 红色为正极，黑色为负极， 切记 DNA 样品由负极往正极泳动 (靠

近加样孔的一端为负)。一般 60 ～ 100V 电压，电泳 20 ～ 40min 即可；

8.    根据指示剂泳动的位置，判断是否终止电泳；

9.    电泳完毕， 关上电源， 在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子

量标准 Marker 比较被扩增产物的大小。

胶回收纯化 DNA

1.   琼脂糖电泳，将特异电泳带用刀切下放入到 EP 管中，称琼脂糖带的重量；

2.   按照每 100mg 加 400µl 的量加入binding buffer，放入到 EP 管振荡器中，45℃ ~

55℃温育振荡，直到所有的琼脂糖都溶解（大概要 5 分钟 ）；

3.   取出纯化柱， 将上述溶解液转移至柱中， 室温下放置 2 分钟， 8,000rpm   离心

1 分钟，弃 EP 管中的液体，将纯化柱放回 EP 管中；

4.   加 500µl 的 wash buffer 至柱中， 8,000rpm   离心 1 分钟。弃管中的溶液；

5.   重复操作 4 步的操作 1 次，最后将纯化柱放入 EP 管中 10,000rpm  离心 30 秒，

除去痕量的 wash buffer；

6.   将纯化柱放入一个新的 EP 管。加 30~40µl H2O 或者 elution buffer 至纯化柱膜 的中央，在37℃或 50℃下放置 2 分钟， 10,000rpm 离心 1 分钟洗脱 DNA，将

EP 管中的 DNA 溶液放在-20℃保存。

7.   注： 若想要不电泳而直接纯化 DNA 溶液， 只需要在第 2 步中按 100µl 液量加 400µl 的 binding buffer,其余的步骤不变。